1.1.3仪器与设备
DHG-9070A型真空干燥箱 上海精宏实验设备公司;万能粉碎机 浙江屹立公贸有限公司;BS110S型电子天平 德国赛多利斯公司;超纯水机 美国密理博公司;5418型离心机 德国Eppendorf公司;HH型电热恒温水槽 金坛荣华仪器制造公司;Synergy II型多功能酶标仪 美国Biotek公司;源`自·751.文/论:文'网,www.751com.cn
1.2 实验方法
1.2.1金丝菊多糖的提取
大小两种金丝菊经粉碎机粉碎成粉,称取20g粉末加入500ml去离子水,放入水浴锅中,在85℃下水浴3h,从水浴锅中取出后进行过滤,过滤完成后加入无水乙醇,且乙醇的含量占总体积的70%,室温放置2h,随后放入离心机,6000 r/min 离心30min,弃上清,取管底沉淀,该沉淀物即为金丝菊多糖,室温挥发干燥备用。
1.2.2 清除羟基自由基(-OH)的测定
采取邻二氮菲-Fe2+氧化法[13]。
(1)将1.0 mL 5 mmol/L邻二氮菲溶液,3.8 mL PBS缓冲液(pH 7.4)和1.0 mL不同浓度的菊花多糖溶液加入反应小瓶中,用枪头充分混匀;
(2)向上述小瓶中加1.5 mL 5 mmol/L硫酸亚铁溶液,充分混匀;
(3)继续加1.0 mL浓度为0.1%的过氧化氢溶液,加水至10 mL,37 ℃水浴中保持30 min;
(4)将上述反应液在536 nm下测定吸光度,为A样;按上述操作,不加双氧水处理为未损伤管,为A未损;不加紫苏多糖溶液为损伤管,为A损。以抗氧化剂Vc为阳性对照。按下式计算•OH清除率: