重组大肠杆菌JM109 OD600nm
大肠杆菌JM109 OD600nm
0.014
图4 重组菌和对照菌的生长曲线
由图4可知,培养4h后,重组大肠杆菌和对照大肠杆菌JM109的生长均处于对数生长期,8h以后基本处于稳定期,培养到14h时,两菌株的OD660 均无显著差异(P>0.05)。该结果表明,转入的磷酸盐吸附蛋白基因片段对于菌的生长没有造成负担.
3.2磷酸盐标准曲线
根据实验方法测得磷酸盐标准溶液及吸光值见表3。根据测得数据绘制标准曲线,见图5。
表3 磷酸盐标准溶液吸光度测定
试管号 1 2 3 4 5 6
PO43-含量mg/ml 0 0.04 0.08 0.40 0.80 1.20
OD660nm 0.003 0.012 0.031 0.151 0.301 0.474
图5 磷酸盐标准曲线
3.3 磷酸盐吸附能力分析
IPTG诱导重组大肠杆菌后磷酸盐吸附量及对照大肠杆菌JM109磷酸盐吸附量见表4和表5。由图6可见,在IPTG处理后,对照组大肠杆菌JM109培养液中磷酸盐浓度一直文持在较高的水平,但重组菌大肠杆菌培养液中磷酸盐浓度则显著下贱,统计学分析表明,两菌株在培养4h,培养液中磷酸盐浓度无显著差异(P>0.05);但在培养8h后,重组菌磷浓度显著低于对照组(P<0.05);培养10h后,重组菌培养液中磷酸盐浓度下降到0.39 mg/mL,约为对照菌的81%。
表4 重组菌大肠杆菌磷酸盐吸附能力测定
时间h 0 1 2 4 6 8 10
吸光度OD660nm 0.194 0.194 0.190 0.186 0.178 0.159 0.151
PO43-含量mg/ml 0.50 0.50 0.49 0.48 0.46 0.41 0.39
表5 对照组大肠杆菌JM109磷酸盐吸附能力测定
时间h 0 1 2 4 6 8 10
吸光度OD660nm 0.194 0.194 0.194 0.194 0.190 0.186 0.186
PO43-含量mg/ml 0.50 0.50 0.50 0.50 0.49 0.48 0.48
图6 IPTG处理后重组大肠杆菌和对照菌培养液中磷酸浓度的比较
4.结论
从phos基因的PCR扩增结果发现(图1),目的基因phos为972bp,条带清晰,但有非特异性扩增条带出现。这可能是PCR扩增过程中设置的退火温度较低导致。
克隆大肠杆菌磷酸盐吸附蛋白基因,转入大肠杆菌JM109中,构建重组菌,该基因能在重组菌中高效表达。
重组菌生长优于对照菌。在IPTG的诱导后,重组菌能大量表达磷酸盐吸附蛋白,磷酸盐浓度约为对照菌的磷酸盐浓度的0.81倍,可见有较好的除磷效果。
在大肠杆菌重组菌中,10 h内KH2PO4吸附量达到0.11 mg/mL,对照大肠杆菌JMl09则没有明显磷酸盐吸附能力,可见重组菌显示出高磷酸盐吸附能力。受体菌的吸附能力较低是因为磷酸盐在细菌细胞内浓度有限,一旦达到一定的浓度细菌本身不再从外界环境中转运磷酸盐,因此,对降低环境中磷酸盐含量的能力有限。
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