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    重组大肠杆菌JM109 OD600nm    
    大肠杆菌JM109 OD600nm    
    0.014
    图4  重组菌和对照菌的生长曲线

    由图4可知,培养4h后,重组大肠杆菌和对照大肠杆菌JM109的生长均处于对数生长期,8h以后基本处于稳定期,培养到14h时,两菌株的OD660  均无显著差异(P>0.05)。该结果表明,转入的磷酸盐吸附蛋白基因片段对于菌的生长没有造成负担.

    3.2磷酸盐标准曲线
    根据实验方法测得磷酸盐标准溶液及吸光值见表3。根据测得数据绘制标准曲线,见图5。
          表3   磷酸盐标准溶液吸光度测定
    试管号    1    2    3    4    5    6
    PO43-含量mg/ml    0    0.04    0.08    0.40    0.80    1.20
    OD660nm    0.003    0.012    0.031    0.151    0.301    0.474
    图5  磷酸盐标准曲线
    3.3 磷酸盐吸附能力分析
    IPTG诱导重组大肠杆菌后磷酸盐吸附量及对照大肠杆菌JM109磷酸盐吸附量见表4和表5。由图6可见,在IPTG处理后,对照组大肠杆菌JM109培养液中磷酸盐浓度一直文持在较高的水平,但重组菌大肠杆菌培养液中磷酸盐浓度则显著下贱,统计学分析表明,两菌株在培养4h,培养液中磷酸盐浓度无显著差异(P>0.05);但在培养8h后,重组菌磷浓度显著低于对照组(P<0.05);培养10h后,重组菌培养液中磷酸盐浓度下降到0.39 mg/mL,约为对照菌的81%。
         表4  重组菌大肠杆菌磷酸盐吸附能力测定
    时间h    0    1    2    4    6    8    10
    吸光度OD660nm    0.194    0.194    0.190    0.186    0.178    0.159    0.151
    PO43-含量mg/ml    0.50    0.50    0.49    0.48    0.46    0.41    0.39
    表5  对照组大肠杆菌JM109磷酸盐吸附能力测定
    时间h    0    1    2    4    6    8    10
    吸光度OD660nm    0.194    0.194    0.194    0.194    0.190    0.186    0.186
    PO43-含量mg/ml    0.50    0.50    0.50    0.50    0.49    0.48    0.48
                图6  IPTG处理后重组大肠杆菌和对照菌培养液中磷酸浓度的比较
    4.结论
    从phos基因的PCR扩增结果发现(图1),目的基因phos为972bp,条带清晰,但有非特异性扩增条带出现。这可能是PCR扩增过程中设置的退火温度较低导致。
    克隆大肠杆菌磷酸盐吸附蛋白基因,转入大肠杆菌JM109中,构建重组菌,该基因能在重组菌中高效表达。
    重组菌生长优于对照菌。在IPTG的诱导后,重组菌能大量表达磷酸盐吸附蛋白,磷酸盐浓度约为对照菌的磷酸盐浓度的0.81倍,可见有较好的除磷效果。
    在大肠杆菌重组菌中,10 h内KH2PO4吸附量达到0.11 mg/mL,对照大肠杆菌JMl09则没有明显磷酸盐吸附能力,可见重组菌显示出高磷酸盐吸附能力。受体菌的吸附能力较低是因为磷酸盐在细菌细胞内浓度有限,一旦达到一定的浓度细菌本身不再从外界环境中转运磷酸盐,因此,对降低环境中磷酸盐含量的能力有限。
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