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    摘要：[目的]探讨转录因子SPL9在葡萄果实发育过程中的作用。[方法]以“藤稔”葡萄为材料，结合 qRT-PCR 技术手段、番茄瞬时转基因等方法阐释SPL(SQUAMOSA promoter binding protein-like) 转录因子基因SPL9调控葡萄果实发育成熟的分子机制。通过PCR的方法从葡萄品种“藤稔”果实中克隆出SPL9基因的 cDNA 全长序列，并通过qRT-PCR分析SPL9在葡萄不同生长时期表达量，并进行了SPL9的植物双元表达载体的构建和番茄基因瞬时表达的实验。[结果]结果表明，在葡萄的不同生长时期SPL9的表达量随着果实发育不断的增加。通过番茄瞬时表达技术表明SPL9参与了果实的发育上色成熟进程，推测SPL9对葡萄果实的生长发育具有重要的调控作用。[结论]转录因子SPL9对葡萄果实发育成熟具有重要作用。28053
    毕业论文关键词：SPL9转录因子；葡萄果实；实时荧光定量PCR；瞬时转基因
    The molecular mechanism of transcription factors SPL9 in regulation of grape fruit ripening
    Abstract： In order to elucidate the putative funetion of the SPL9 transcription factor during the grape fruit development. Taking "Fujiminori” grape as material, combining methods like qRT-PCR technology, tomato transient transgene to demonstrate the molecular mechanism of transcription factor SPL (SQUAMOSA promoter binding protein like) gene SPL9 in regulation and control of the maturation of grape fruit. Clone the cDNA full-length sequence of SPL9 gene from "Fujiminori" grape fruit by using the method of PCR, and analyze the expression amount of SPL9 in different growing period of grape through qRT-PCR, and achieve the construction of plant binary expression vector of SPL9 and the transient expression of tomato gene. The result shows that in grape fruit’s different growing period, the expression amount of SPL9 increases constantly with the growth of the fruit. By the technology of tomato transient expression, it shows that SPL9 takes part in the growth and development of the fruit, and it infers that SPL9 plays an important role in regulation and control of the growth and development of the grape fruit. These results suggested that SPL9 is required for grape fruit development.
    Key words: SPL9 transcription factor; grape fruit; real time fluorescence ration PCR; transient transgene
    目  录

    摘要1
    关键词1
    Abstract1
    Key words1
    引言1
    1 材料与方法3
    1.1 试验材料 3
    1.2 葡萄果实RNA提取 3
    1.3 mRNA的分离与纯化3
    1.4 实时荧光定量PCR分析3
    1.5 超表达载体构建及果实瞬时表达体系3
    1.5.1 感受态细胞的制备——氯化钙法3
    1.5.2 重组质粒的转化3
    1.5.3 质粒的小量制备——碱裂解法制备4
    1.5.4 感受态的制备4
    1.5.5 转化农杆菌4
    1.5.6 农杆菌侵染4
    1.6 生物学信息分析5
    2 结果与分析5
    2.1 SPL9基因序列和蛋白质序列的特征5
    2.2 不同物种的初步进化分析7
    2.3 SPL9在果实发育过程中的表达趋势及意义8
    2.4基因SPL9可能促进葡萄早熟8
    3 讨论 9
    致谢10
    参考文献10
    转录因子SPL9在葡萄果实发育过程中的功能分析
    葡萄是葡萄科葡萄属藤本植物，它本身营养丰富，人们对它有很高的赞誉。根据联合国粮食及农业组织报道，葡萄栽培的面积始终在各类水果中保持第一，其生产量居各种水果的前几位。葡萄不仅是世界上四大水果之一，其栽培在我国历史十分悠久，中国也是一个大型的葡萄种植国家，根据新鲜葡萄产量的计算，中国已多年在世界上排名第一。除了可以作为新鲜水果来使用，而且可以用作酿造酒，制作果汁和葡萄干等加工食品的原料。葡萄具有较高营养，它含有很多矿物质元素、各种氨基酸和蛋白质等营养物质 [1]。调控葡萄果实成熟对葡萄的鲜食、保鲜贮藏和加工产品质量好坏都十分关键。近些年来，我国设施葡萄产业飞快发展，葡萄促成和延迟栽培技术应用越来越普遍。尽管这些栽培模式取得一定的收益，但促成或延迟成熟期后往往会伴随着葡萄果实品质的下降。产生这种情况的是有多种原因造成的，“对葡萄果实成熟的分子机理认识还不够充分，从而不能更科学地采取栽培措施调控葡萄果实发育成熟过程”可能是主要原因之一。
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