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    2                                dNTP                          5μL

    3                               MgSO4                                       3μL

    4                               前引物                          1μL

    5                               后引物                          1μL

    6                                cDNA                          1μL

    7                               KOD酶                         1μL

    8                                 H2O                          33μL

    表4  PCR条件设置

    Table 4  PCR conditions set

    编号                             温度                         时间

    1                               94℃                         2min

    2                               98℃                          10s 

    3                               56℃                          30s                                                                    

    4                               68℃                        1min45s   

    5                           2-4循环35次

    6                               94℃                         2min    

    7                                4℃                          ∞

    2.2.4 PCR产物的连接与转化

    试剂：Taq酶、SolutionⅠ、PMD18-T、DEPC水、DNA ligation Kit Ver. 2.0试剂盒（TaKaRa）、感受态大肠杆菌、LB培养基。

    方法：（1）连接：a：25μL PCR加A尾体系如表5，72℃，30min后做连接。

                      b：使用DNA Ligation Kit Ver. 2.0试剂盒对以上步骤中获得的SlNAC10基因的纯化PCR产物和PMD18-T载体进行连接。体系如表6所示，16 °C连接过夜。

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