外源褪黑激素对甘薯幼苗耐盐能力的影响(3)

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本实验通过不同浓度的MT处理徐32，加入营养液培养在10日内取样，测量超氧阴离子、电导率以及MDA相应的含量。分析不同浓度的褪黑素对甘薯耐盐性的强弱。

2 材料与方法

2.1 材料：

2.1.1 实验材料：

徐32薯块，由江苏省徐州市农科院甘薯研究中心提供。

2.1.2 实验幼苗的选取：文献综述

薯块萌发后选取徐32甘薯幼苗，挑选长势较好大小差异不大的的50株植株。

2.1.3 实验试剂：

氯化钠核黄素 Tris-HCl buffer 硫代巴比妥酸（TBA）三氯乙酸 TCA 磷酸缓冲液盐酸羟氨对氨基苯磺酸 1-萘胺

2.2 方法：

2.2.1 甘薯幼苗的培养：

挑选出生长情况良好，生长状态相似的土培植物，徐32，四分之一霍格兰培养液培养十天

2.2.2 不同浓度MT处理

配制褪黑素的浓度为（100μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM），预处理甘薯幼苗三天，再加盐处理，分别标记为nMT+NaCl处理组，过一个星期后对三个常规伤害指标（MDA）丙二醛、超氧阴离子、电导率进行测量。

2.2.3 酶活性的测定：

2.2.3.1 酶液的提取：

(1)配制提取液浓度为50 毫摩尔每升的Tris-HCl buffer 并且调节PH等于7.0。

(2)取不同浓度下MT处理过的叶片各0．3g，根为0.2 g，加入液氮研磨，用EP管收集研磨物，提取时加入3 毫升提取液，放到冰谷中，提前将冷冻离心机预冷温度为4摄氏度，用1 0000转每分钟离心一刻钟，再用枪吸取上清液，在冰中保存。用于测定MDA的活性。来!自~751论-文|网www.751com.cn

2.2.3.2 丙二醛（MAD）的测定：

（1）称量5克硫代巴比妥酸，用三氯乙酸定容到1升。

（2）取叶片并称重，放在小研钵里加入氮气研磨，将碎末装入管中，加入TCA 3毫升用4000转每分钟下离心十分钟。离完心EP管中的上清液即为样品提取液。接下来吸取2毫升提取液，向其中加入2毫升浓度为百分之0.6的TBA混匀，并且在试管上加盖，煮沸15分钟,冷却离心。吸取上清测定在波长为600nm、532nm和450nm下的OD值[6]。