配置银杏培养基:取30克银杏叶,剪碎,分装到2个的锥形瓶内,加入PDA液体培养基,量以浸透银杏叶为准,在121℃条件下高压灭菌20分钟。
(3)接种
在超净工作台上用移液枪移去相等含量的同种北虫草种子液到大米培养基和银杏培养基上进行培养。对照组:培养基主要是大米;培养基实验组:培养基主要为银杏。
2.2.2 样品处理
(1)制备虫草菌提取物
将实验组和对照组中的虫草菌分别取出并粉碎与液体(甲醇:丙酮=1:1)以10g:100mL的比例混合,加入圆底烧瓶中进行回流提取1h,收集且合并提取液,浓缩至体积的1/10即可得到样品[12],将实验组浓缩得到的样品记为样品A,将对照组浓缩得到的样品记为样品B。来!自~751论-文|网www.751com.cn
(2)制备银杏提取物
将实验组中用于制作银杏培养基中的银杏取出晾干称量,作为实验组C。另取同等质量的干燥银杏叶片作为对照组D。
将对照组D和实验组C中的银杏叶取出分别与液体(甲醇:丙酮=1:1)以10g:100mL的比例混合,加入圆底烧瓶中进行回流提取1h合并提取液,浓缩至体积的1/10[12]。将实验组C浓缩得到的样品记为样品C,将对照组D浓缩得到的样品记为样品D。
(3)标准品检验实验
取三支试管分别标号1、2、3。在三支试管中都加入等量的硫酸铵,无菌水。在1号试管中加入5mL山萘酚,在2号试管中加入5mL槲皮素,在3号试管里加入5mL季鼠李素。在三支试管中接种同等体积的同种北虫草菌种子液。振摇15-20天,将三支试管里的液体分别浓缩至一半,经过LC-MS/MS检测[10]。
(4)检测
通过HPLC方法检测样品A和样品B中虫草菌提取物的含量[13],通过LC-MS技术收集并检测标准品生物转化产物,对比分析得出虫草提取物中虫草素、虫草酸、腺苷、多糖和可溶性蛋白的变化及其原因。
通过紫外分光光度法检测样品C和样品D中的银杏黄酮的含量[13],通过HPLC-ELSD检测银杏内酯和银杏酚酸的含量,对比分析得出银杏内酯、黄酮、酚酸的变化及其原因。