北虫草作为冬虫夏草的理想替代品,具有极高的应用价值和研究价值,但仅靠野生北 虫草已经无法满足市场需求。因现今北虫草栽培主料为小麦和大米,因此对其栽培营养液 中钾盐种类、浓度,以及甘油添加进行研究,以期提高北虫草的品质与产量。
2 材料与方法
2.1 材料与仪器
2.1.1 供试菌种
北虫草(C . militaris)菌种 cm01 由淮阴师范学院资源微生物研究所提供。
2.1.2 主要仪器和设备
MC-30S 灭菌器 日本 ALP 公司;SW-CJ-1FD 型单人单面净化工作台 苏州净化设备有 限公司;HD-930 组合式全温摇床 太仓市博莱特实验仪器厂;SPX-250B 生化培养箱 美 胜实验设备有限公司。
2.1.3 材料和试剂
新鲜大米、新鲜小麦、马铃薯、蛋白胨、石膏,甘油、K2SO4、KCl、KH2PO4、MgSO4、葡 萄糖、琼脂粉均为国产分析纯。
2.2 试验方法
2.2.1 液体菌种制作
称取去皮马铃薯 200g,加 1000 mL 自来水,煮沸 10 min,用纱布过滤,滤液加白糖 20g,磷酸二氢钾 1.00 g,硫酸镁 0.50 g,石膏 1.00g,蛋白胨 10.00g,补水至 1000 mL, 搅拌溶解,分装 10 个 250mL 三角瓶,每瓶 100 mL[6]。121℃,20min 灭菌,冷却后,每 瓶接 3 块绿豆大小的试管斜面菌种,120r/min,21℃摇瓶培养 5d,至菌丝球明显。
2.2.2 北虫草子座培养
取洁净的 500mL 罐头瓶,分别装入 30g 的小麦或大米,再加入不同配方(见表 1、表 2)的营养液,每个处理 8 瓶。将罐头瓶封口,置于 121℃,30min 灭菌。冷却后,每瓶均 匀接入 2mL 液体菌种,避光培养 3-5d 后,上架。在 23℃条件下,培养 40-55d 后,待子 座(呈橘黄色)长满瓶,子囊壳开始膨大并有粉状物出现,即表明子座已经成熟,可以进 行采收,数据测定[7]。
表 1 小麦/大米钾盐试验配方来`自^751论*文-网www.751com.cn
组别 A B C
编号
浓度(mol/L) K2SO4(g/L) KCl(g/L) KH2PO4(g/L)
1 0.005 0.435 0.3725 0.68
2 0.01 0.880 0.7550 1.37
3 0.015 1.335 1.1475 2.07
4 0.025 2.25 1.9375 3.48
5 0.035 3.185 2.7475 4.90
6 0.05 4.600 3.9750 7.05
表 2 甘油添加配方(小麦主料)
编号 甘油浓度(g/mL)
G1 0.001
G2 0.002
G3 0.004
G4 0.006
G5 0.010