菜单
  

     
    图1-1 检测质粒构建流程图
    Fig 2-1 The flow chart of constructing the detection plasmid

    1.5.2本实验的基本原理
    群体感应涉及生物荧光、毒素的生成[12]、生物被膜、细菌浮游、质粒转移、抗生素的合成、芽孢的形成、胞外酶的形成等许多生理功能。海洋费氏弧菌(Vibrio fischeri)的群体感应在20世纪70年代最早被报道,并且研究最为透彻。该菌通过LuxⅠ合成信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactone,AHL),这种信号分子会和其受体蛋白LuxR结合,启动荧光素酶操纵子的表达[13]。
    绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是来源于发光水母(Aequorea Victoria)的一种功能独特的蛋白质,分子量为27kD,具有238个氨基酸。由于GFP的自发荧光特性,发光不需要其他的协助因子,荧光生色团对热、pH值、化学变性剂稳定,具有较强的抗光漂白作用,因而在分子生物学的众多研究领域中应用广泛,比如用于特定蛋白的标记定位、活体内的肿瘤检测、药物筛选等等[14]。
    1.5.3 本课题研究的意义
    近年来,有关细菌QS信号分子AHL结构与功能的研究方兴未艾,更多信号分子可能被发觉,进一步研究可能会发现或证实由QS控制的新细菌特征。在一些细菌感染中QS现象已得到证明,AHL在疾病治疗中作为生物标记已被用于早期疾病诊断和活性检测,这可能是一种非常有效的分析手段[9]。因此,建立有效、快速、准确检测AHL的方法对于深入研究细菌QS现象具有非常重要的意义。
    2. 实验材料与方法
    2.1 材料与仪器设备
    2.1.1 菌种
    表2-1.实验中的菌株及质粒
    Table2-1 Bacterial strains and plasmids used in this study
    菌株    质粒    相关特点    来源或参考
    E.coli            
    Top10F '    无质粒    无抗性    实验室提供
    DH5α    无质粒    无抗性    实验室提供
    117    pLuxGFPuv2(见图2-1)    Kmr    实验室提供
    126    pLuxR(见图2-2)    Kmr    实验室提供
    图2-1 菌株117质粒
    Fig 2-1 Plasmid of strain117
    图2-2 菌株126质粒
    Fig 2-2 Plasmid of strain126
    2.1.2 实验材料
    此次实验主要购买的试剂及厂家情况见表2-2。
    表2-2 实验试剂
    实验试剂    厂家
    LB液体培养基、LB固体培养基    生工生物有限公司
    Biowest Agarose regular    GENE TECH(SHANGHAI)COMPANY LIMITED
    卡那霉素粉末    生工生物工程(上海)有限公司
    PCR试剂盒    生工生物工程(上海)有限公司
    引物gfp1031f    上海捷瑞生物工程有限公司
    引物gfp2841r    上海捷瑞生物工程有限公司
    引物pD1    上海捷瑞生物工程有限公司
    AatⅡ限制性内切酶    Fermentas Life Sciences
    Alkaline Phosphatase    Worthington Biochemical Corporation
    50×TAE电泳缓冲液贮存液    生工生物工程(上海)有限公司
    小剂量质粒提取试剂盒    生工生物工程(上海)有限公司
    质粒DNA小量制备试剂盒    上海捷瑞生物工程有限公司
    UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒    上海生工生物工程技术服务有限公司
    SK2301一步制备感受态细胞溶液SSCS    上海生工生物工程技术服务有限公司
    NormalRunTM250bp-Ⅱ DNA
  1. 上一篇:拟南芥LysM受体样激酶的克隆与筛库载体的构建
  2. 下一篇:利用冰晶核蛋白构建磷酸盐吸附蛋白大肠杆菌细胞表面展示体系
  1. 基于叶绿体psbA-trnH基因间...

  2. 低温胁迫下丛枝菌根对玉...

  3. 生物分子的高灵敏荧光检测

  4. 药用植物中非经典抗菌活...

  5. 高盐废水对人工湿地中黄...

  6. 干旱胁迫对两广唇柱苣苔...

  7. ErbB信号通路的细胞内分子...

  8. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

  9. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  10. 乳业同业并购式全产业链...

  11. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  12. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  13. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  14. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  15. 电站锅炉暖风器设计任务书

  16. 十二层带中心支撑钢结构...

  17. 大众媒体对公共政策制定的影响

  

About

751论文网手机版...

主页:http://www.751com.cn

关闭返回