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正是由于环二肽具有广泛的生物活性和不对称催化活性，而从动植物中提取不仅步骤繁琐且效率低下，于是越来越多的科学家开始研究采用化学方法来合成环二肽。环二肽的合成方法主要有固相合成法和液相合成法两种[54]。固相合成法是线性二肽在树脂上成环，然后从树脂上脱下得到环二肽。而液相合成法是在稀的溶液中游离的线性肽首尾相连成环。最近也有利用微波辐射法合成环二肽的文献报道[55]。
1.3.1 固相合成法
固相法合成环二肽的主要步骤是线性二肽在树脂上环化，然后裂解下来，这样可避免分子间的二聚和多聚，反应不需在高度稀释的溶液中进行，过量的缩合试剂及副产物可通过洗涤和过滤除去[56]。这一技术的基本原理是将ɑ一氨基酸的N端与一端固定在固相支持物上已知序列的一段肤段连接。固相合成的一般步骤如图1•1[7]。氨基酸的 C 端通过连接臂苯甲酰酯键与载体聚苯乙烯珠相连，然后脱掉 Boc 保护基，再与另一分子的氨基酸耦合形成保护的直链二肽，再脱保护基分子内氨解环化形成环二肽，从树脂上裂解下来。
图 1•1 固相合成一般步骤
虽然像苯甲酰酯这种连接臂可以成功的应用于环二肽的固相合成，但这种酯键容易受到亲核进攻，常导致其在接肽反应中产率不高。而通过变构保险连接臂（safety-catch linkers）将肽连接到树脂上就可以避免这种问题的发生如图1•2。变构保险连接臂在接肽反应过程中保持稳定，只在肽合成后才被活化，同时也活化了肽的 C 端羧基，使之可以与游离的 N 端进行分子内反应形成环二肽。
图 1•2 变构连接固相合成法
1.3.2 液相合成法[54]
液相合成法是经典的合成方法，也是最常用的合成方法。线型肽成环属于分子内反应，为避免发生分子间反应生成线性或环状的二聚和多聚体，一般在高度稀释的溶液(10-3一l0-4mol/L)中进行.溶液法合成环肽可直接反应，即将脱保护后的线型肽前体直接在缩合试剂的缩合下成环，也可先将一端(一般为C端)活化，然后成环。环二肽的合成中最关键的一步是环化反应，根据成环位置的不同可分为五种方法[57]，如图 1•3所示：分子内 N1-C2成环，分子内 N1-C6成环、分子间 N1-C2/C3-N4成环、分子间 N1-C2/N4-C5成环、分子间 C2-N1-C6成环。
图 1•3 环二肽的五种成环方法
1.3.2.1 分子内 N1- C2成环
分子内 N1-C2成环是合成环二肽最常用的方法，主要分为直接法和 C 端活化法两种。直接法是在两端游离的线性肽的稀溶液中加入有效的缩合试剂直接缩合形成环二肽；C 端活化法又分为活泼酯法、酰基叠氮法和混合酸酐法、酰卤法等。
（1） 活泼酯法 活泼酯法是最初合成环肽的常用方法，将羧基制成活泼酯脱去 N-端保护基然后成环。活泼酯法有硝基苯酯法(ONp)[58]、N-羟基琥珀酰亚胺法(OSu)[59]、五氟苯酯法（Opfp）、1-羟基苯并三唑法（OBt）和 N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二酰亚胺法（ONdc）等，见图 1•4。2004 年高凯[60]等将溶液法与活泼酯法结合起来，以 L-苯丙氨酸、L-组氨酸和 D-苯丙氨酸、 D-组氨酸为原料， 用苄氧羰基保护苯丙氨酸的 N 端和进一步用硝基苯酚酯活化其 C 端， 再与 C 端保护的组氨酸甲酯缩合，得直链二肽，再经钯／碳催化氢化脱保护基，闭环， 得环( L- 苯丙- L - 组) 二肽和环(D- 苯丙- D- 组) 二肽。活泼酯中间体具有一定的稳定性，可以分离和纯化，也具有一定反应活性，但活泼酯的立体效应大，反应活性不高，使环化速度减慢，这样羧基活化的多肽链在溶液体系中长期存在增大了消旋的可能[57]。